2011. július 8.

Szerző:
Paulik Katalin

Új elven alapuló, gyors és megbízható DNS-elválasztás

Magyarország egyik elismert kutató-, fejlesztő- és gyártóközpontjában, az 1993-ban alapított Izotóp Intézet Kft.-ben nemcsak radioizotóp-alkalmazásokkal foglalkoznak. Legújabb termékük — a Molekuláris biológia részlegükben egy új elven alapuló DNS-elválasztási módszer kifejlesztése — dr. Forster Tibor nevéhez fűződik.


Mi a fejlesztés lényege?
− A genetikai vizsgálatokhoz tiszta DNS-re van szükség, azonban a biológiai minta sejtmagjában fehérjével burkolt állapotban található a DNS, így a munka legelső lépése minden esetben a DNS izolálása kell hogy legyen. Ezt követheti például a PCR technológia (polimeráz-láncreakció), amely lehetővé teszi a DNS egy kis darabjának megsokszorozását, vagy a DNS-szekvenálás, amelynek során egy adott DNS-fragmentum nukleotid sorrendjét meghatározzák. Az általunk kifejlesztett SOLEX 2TTM technológia gyors, egyszerűen használható, kényelmes és megbízható módszer, amellyel nagyobb molekulasúlyú DNS-fragmentek izolálhatók. A piacon kapható szilárd fázisú kitektől eltérően a SOLEX 2TTM genominális DNS-izoláló készlet folyadék fázisú szétválasztási módszeren alapul. Egy minta feldolgozásához csupán két cső szükséges, innen az elnevezésben a 2T. Felhasználásra kész állapotban szállítjuk, ami azt jelenti, hogy a csavaros kupakkal lezárt műanyag kapszulák az összes szükséges komponenst megfelelő arányban kimérve tartalmazzák. Olyan technológia kifejlesztésére törekedtünk, amellyel leegyszerűsíthető az izolálás folyamata, és a végeredmény egy olyan optimalizált puffer, amely a DNS-kivonáshoz szükséges összes komponenst tartalmazza. A módszer nagy előnye, hogy az izoláláshoz alkalmazott kétfázisú kolloid rendszernél a kapszulában alulra kerül az összes szennyező, fölül gyakorlatilag csak a sóoldat és a tiszta DNS marad. A homogenizálást és az inkubálást követő 4 °C-on történő centrifugálás során a szennyezőket tartalmazó, kolloidban dús fázis megszilárdul, így a tetejéről pipettázás nélkül is le lehet önteni a megtisztított DNS-t. A sóoldatban lévő DNS kinyeréséhez speciális kicsapásos módszert fejlesztettünk ki, ez történik a második csőben, amelyben szintén minden komponenst előre kimértünk.

Az új rendszer miben tér el a jelenleg alkalmazott technológiáktól? Egyszerűbb és kényelmesebb a használata, de milyen esetekben jelent konkrét előnyt?
− A piacon kapható, legelterjedtebb szilárd fázisú szilika-membrános (különleges szilícium-dioxid alapú membrán) rendszereknél a biológiai mintát általában fehérjebontó enzimmel emésztik meg. A szennyezőktől megszabadított DNS-t, a megemészett fehérjét és a sejttörmeléket tartalmazó oldatot egy olyan, két részből álló műanyag kapszulába helyezik, amelyet szilika részecskékből, szálakból álló membrán választ el. Centrifugálás során – a keresztülhaladó folyadékból – erre a membránra kötődik rá a tiszta DNS. Azonban az apró szilika szemcséken keresztül átszűrve nem lehet nagy molekulasúlyú DNS-t kinyerni a szilika-membrános technológiával, ezért bizonyos biológiai mintáknál előnyösebben használható a SOLEX 2TTM készlet. Például rovarok genetikai vizsgálatánál a kitin nem emészthető, emiatt a hagyományos technológiánál gyakran előfordul, hogy eldugul a membrán. A SOLEX 2TTM rendszernél ugyanis nincs szűrő felület, a kitin egyszerűen lesüllyed az alsó fázisba. Ugyanez a probléma merülhet fel növények genetikai vizsgálatánál is az emészthetetlen cellulóz miatt. A SOLEX 2TTM rendszer kíméletesebb a hagyományos technológiánál, emiatt nagyobb molekulasúlyú DNS-t lehet vele kinyerni. Bizonyos genetikai vizsgálatoknál fontos, hogy minél hosszabb szakaszokat, akár teljes géneket tartalmazó DNS-t lehessen izolálni.
A legújabb termékükről milyen visszajelzéseket kaptak eddig?
− A piaci bevezetésnél tartunk jelenleg, s mivel elsősorban kutatási célokra használják ezt a termékünket, a partner kutatóintézeteknek mintákat küldtünk, hogy próbálják ki, és győződjenek meg maguk a hasznosságáról. Jó visszajelzéseket kaptunk, szeretnek vele dolgozni, ám a legnagyobb elismerés mégiscsak az, hogy már folyamatosan kapjuk a megrendeléseket.•


 
Archívum
 2011  2012  2013  2014  2015  2016  2017  2018  2019  2020  2021
Címkék

Innotéka